核心體現:采用顆粒極細的固定相(通常為 3~10μm 的硅膠或化學鍵合相),柱效可達數千至數萬理論塔板數,遠高于經典液相色譜(僅幾十到幾百)。
實際效果:能快速分離結構相似的復雜混合物,例如在藥物分析中,可同時分離樣品中主成分、異構體及微量雜質(如抗生素中的降解產物),解決了傳統方法難以區分的 “近鄰峰" 問題。
原理支撐:通過高壓輸液泵(壓力可達 10~40MPa)驅動流動相,大幅縮短流動相在色譜柱中的停留時間,同時高效固定相的傳質阻力小,加快了組分分離速度。
典型案例:傳統液相色譜分析一個樣品可能需要數小時,而 HPLC 通常在幾分鐘到幾十分鐘內完成,例如食品中防腐劑(苯甲酸、山梨酸)的檢測可在 10 分鐘內完成分離和定量。
檢測器優勢:配備多種高靈敏度檢測器,如紫外 - 可見檢測器(UV-Vis)、熒光檢測器(FLD)、質譜檢測器(MS)等,檢測限可達 ng(納克)甚至 pg(皮克)級別。
應用場景:在環境監測中,可檢測水中痕量污染物(如農藥殘留、多環芳烴),濃度低至 0.1μg/L 仍能準確定量;在臨床診斷中,可測定血液中微量激素(如腎上腺素),助力疾病早期篩查。
分析對象:不受樣品揮發性和熱穩定性限制,適用于 80% 以上的有機化合物分析,包括高沸點、大分子、強極性、離子型及熱不穩定物質(如蛋白質、多肽、糖類、藥物代謝物等)。
對比優勢:氣相色譜(GC)僅適用于揮發性、熱穩定物質(約 20% 有機化合物),而 HPLC 可彌補其不足,例如中藥中的皂苷、生物堿等成分均需通過 HPLC 分析。
定性能力:結合保留時間、光譜信息(如二極管陣列檢測器 DAD 的紫外光譜圖)及聯用技術(如 HPLC-MS),可對未知組分進行結構鑒定,減少誤判。
定量精度:通過外標法、內標法等校準方式,在一定濃度范圍內線性關系良好(相關系數通常 > 0.999),相對標準偏差(RSD)可控制在 1% 以內,滿足藥品純度檢測、食品添加劑等嚴格要求。
操作流程:現代 HPLC 配備自動進樣器、智能工作站,可實現樣品自動進樣、梯度洗脫程序控制、數據自動采集與處理(如峰面積計算、報告生成),減少人為操作誤差。
高效批量分析:適用于高通量檢測,例如實驗室一天可完成數百個樣品的分析(如藥物研發中的化合物庫篩選),大幅提升工作效率。
分離調控:通過改變流動相的組成(如甲醇 - 水比例)、pH 值、流速等參數,可靈活調整組分的保留行為,優化分離效果。
梯度洗脫優勢:對于復雜樣品(如天然產物提取物),采用梯度洗脫(流動相組成隨時間變化)可使強保留組分快速流出,避免峰形展寬或拖尾。
高效液相色譜儀憑借高效、快速、靈敏、廣譜、準確、自動化等特點,成為現代分離分析領域的核心工具。其性能持續提升(如超高效液相色譜 UPLC 的出現,進一步縮短分析時間、提高分辨率),在科研探索、質量控制、安全檢測等領域發揮著不可替代的作用。
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