流動相配制：根據實驗需求選擇合適的流動相（如甲醇 - 水體系、乙腈 - 緩沖鹽溶液），使用高純度試劑和超純水配制，并通過 0.45μm 濾膜過濾，去除顆粒雜質，防止堵塞色譜柱與管路。配制后需進行超聲脫氣 15 - 30 分鐘，避免氣泡進入系統影響基線穩定性。
樣品處理：確保樣品溶解，使用 0.22μm 或 0.45μm 濾膜過濾，去除不溶物；對于復雜基質樣品（如生物組織提取物），需進行萃取、凈化等前處理，防止雜質污染色譜柱與檢測器。
儀器檢查：確認輸液泵、進樣器、檢測器等部件連接正常；檢查儲液瓶中流動相余量充足，廢液瓶空間足夠；查看色譜柱標簽信息，確認其規格（如 C18、5μm、250×4.6mm）與實驗需求匹配，并確保柱溫箱溫度設定范圍符合色譜柱耐受條件。
系統沖洗：開機后，使用低流速（如 0.3 - 0.5mL/min）的初始流動相沖洗系統 15 - 30 分鐘，排除管路中的氣泡與殘留雜質；若更換流動相體系（如從水相切換至有機相），需使用中間過渡溶劑（如異丙醇）逐步置換，防止鹽析或相分離。
梯度洗脫程序設定：根據樣品特性，在工作站軟件中設置流動相比例變化梯度。例如，反相色譜分離多組分化合物時，可設定初始有機相比例為 20%，在 20 分鐘內線性升至 80%，以實現不同極性組分的有效分離。
流速與溫度調節：一般情況下，流速設置為 0.8 - 1.2mL/min；柱溫箱溫度設定為 25 - 40℃，提高分離效率并降低基線噪音。
檢測器參數調整：若使用紫外 - 可見分光檢測器（UV - Vis），需設定檢測波長（如檢測苯環類化合物常用 254nm）；熒光檢測器（FLD）則需設置激發波長與發射波長；質譜檢測器（MS）需優化離子源溫度、噴霧電壓等參數。
進樣操作：手動進樣時，使用專用微量注射器吸取適量樣品（通常為 1 - 10μL），通過六通閥進樣；自動進樣器則需在軟件中設置進樣體積、進樣序列及樣品盤位置，確保樣品瓶編號與軟件設置一致。
運行監測：進樣后，實時觀察色譜圖基線穩定性、峰形及保留時間。若基線波動較大或出現鬼峰，需排查流動相污染、色譜柱殘留或檢測器故障等問題；若峰形拖尾或分叉，可能需調整流動相 pH 值、更換色譜柱或優化流速。
重復測定：為保證數據可靠性，每個樣品建議重復測定 3 次，計算峰面積或峰高的相對標準偏差（RSD），通常要求 RSD≤2%。
峰識別與積分：使用工作站軟件自動識別色譜峰，調整積分參數（如斜率靈敏度、峰寬閾值）確保積分結果準確；對于重疊峰，可采用手動積分或優化分離條件重新測定。
定性定量分析：通過比較樣品峰保留時間與標準物質保留時間進行定性；采用外標法、內標法或標準加入法，根據標準曲線計算樣品濃度。
報告生成：導出分析數據，生成包含樣品信息、分析條件、色譜圖及結果數據的檢測報告，必要時附原始數據與譜圖。
日常維護：分析結束后，使用高比例有機相（如 90% 甲醇 - 水）沖洗色譜柱 30 - 60 分鐘，去除殘留樣品與雜質；關閉儀器前，將流速降至 0，依次關閉檢測器、輸液泵與工作站軟件。
定期維護：每月更換流動相管路過濾白頭，防止堵塞；每半年對輸液泵密封圈、進樣器針頭等易損部件進行檢查與更換；定期使用標準物質驗證儀器性能（如保留時間重復性、峰面積重復性），確保儀器處于最佳工作狀態。
液相色譜儀的規范使用需兼顧操作細節與理論知識。通過嚴格遵循上述流程，并結合具體實驗需求靈活調整參數，既能獲得可靠的分析結果，也能有效延長儀器使用壽命，充分發揮其在科研與檢測領域的價值。
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